Vijf sterkte:
● Instrument geconfigureerd met de stap voor extractie en zuivering van nucleïnezuren
● Instrument geconfigureerd met ultrasone extractiemodule
● Instrument geconfigureerd met volledig automatisch
● Instrument geconfigureerd met variabele temperatuurversterking
● Instrument geconfigureerd met volledig gesloten reagenskit
1. Moeten nucleïnezuurdetectiereagentia worden geëxtraheerd en gezuiverd?
Het principe van nucleïnezuurdetectie is als volgt: onder invloed van primer wordt DNA-polymerase gebruikt om kettingreactieamplificatie uit te voeren op template-DNA/RNA (waarvoor omgekeerde transcriptie van NA nodig is), en vervolgens wordt de hoeveelheid vrijgekomen fluorescentiesignaal gedetecteerd om te bepalen of het monster het nucleïnezuur (DNA/RNA) van de te detecteren ziekteverwekker bevat.
1) Monsters die niet zijn geëxtraheerd of gezuiverd, kunnen veel componenten bevatten die het eindresultaat beïnvloeden: nuclease (dat het doelnucleïnezuur kan oplossen en vals-negatief kan veroorzaken), protease (dat DNA-polymerase kan verminderen en vals-negatief kan veroorzaken), zware metalen zout (wat leidt tot de inactivatie van synthase en fout-positieve resultaten veroorzaakt), een te zure of te alkalische PH (waardoor de reactie kan mislukken), onvolledig RNA (wat leidt tot vals-negatieve reverse transcriptie-falen).
2)Sommige monsters zijn moeilijk direct te amplificeren: Gram-positieve monsters en sommige parasieten, vanwege hun dikke celwanden en andere structuren, als ze het nucleïnezuurextractie- en -zuiveringsproces niet doorlopen, kan de extractievrije kit hiervoor falen. monsters.
Daarom wordt aanbevolen om de testkit of het instrument te selecteren dat is geconfigureerd met de nucleïnezuurextractiestap.
2. Chemische extractie of fysische ultrasone fragmentatie-extractie?
Over het algemeen kan chemische extractie worden toegepast op het grootste deel van de voorbehandeling en zuivering.Bij dikwandige Gram-positieve bacteriën en sommige parasieten is het echter ook zo dat chemische extractie geen effectieve nucleïnezuurmatrijzen kan verkrijgen, wat resulteert in vals-negatieve detectie.Bovendien worden bij chemische extractie vaak sterke middelen gebruikt. Als de elutie niet grondig is, is het gemakkelijk om sterke alkaliën in het reactiesysteem te introduceren, wat resulteert in onnauwkeurige resultaten.
Ultrasone fragmentatie maakt gebruik van fysiek vermalen, wat met succes is toegepast door GeneXpert, een toonaangevende onderneming op het gebied van POCT voor menselijk gebruik, en heeft een absoluut voordeel bij de nucleïnezuurextractie van sommige complexe monsters (zoals Mycobacterium tuberculosis).
Daarom wordt aanbevolen om een testkit of instrument te selecteren dat is geconfigureerd met een nucleïnezuurextractiestap.en het is optimaal als er een ultrasone extractiemodule is.
3. Handmatig, halfautomatisch en volautomatisch?
Dit is een probleem van arbeidskosten en werkefficiëntie.Momenteel zijn dierenziekenhuizen zonder voldoende personeel en de extractie en detectie van nucleïnezuren een werk dat bepaalde vaardigheden en ervaring vereist.Het lijdt geen twijfel dat de volautomatische nucleïnezuurextractie- en detectiemachine de perfecte keuze is.
4. Constante temperatuurversterking of variabele temperatuurversterking?
De amplificatiereactie is een nucleïnezuurdetectielink, en de professionele technologie die bij deze link betrokken is, is complex.Grofweg worden enzymen gebruikt om het nucleïnezuur te amplificeren.Bij het amplificatieproces wordt het versterkte fluorescentiesignaal of het ingebedde fluorescentiesignaal gedetecteerd.Over het algemeen geldt dat hoe eerder het fluorescentiesignaal verschijnt, hoe groter het doelgengehalte van het monster is.
Amplificatie bij constante temperatuur is een nucleïnezuuramplificatie bij een vaste temperatuur, terwijl amplificatie bij variabele temperatuur een cyclische amplificatie is, strikt volgens de denaturatie-annealing-extensie.Er is gebruik gemaakt van de constante temperatuurversterkingstijd, terwijl de variabele temperatuurversterkingstijd sterk wordt beïnvloed door de snelheid waarmee de temperatuur stijgt en daalt van het instrument (momenteel zijn veel fabrikanten in staat geweest om 40 versterkingscycli uit te voeren in ongeveer 30 minuten).
Als de laboratoriumomstandigheden goed zijn en de zonering streng is, kan redelijkerwijs worden gesteld dat het nauwkeurigheidsverschil tussen beide niet groot zal zijn.Variabele temperatuuramplificatie zal echter in een relatief kortere tijd meer nucleïnezuurproducten synthetiseren.Voor laboratoria zonder strikte bestemmingsplannen en zonder professioneel opleidingspersoneel zal het risico op lekkage van nucleïnezuuraërosolen groter zijn. Het vals-positieve resultaat treedt op zodra lekkage optreedt, en dit is uiterst moeilijk te elimineren.
Bovendien is amplificatie bij constante temperatuur ook gevoeliger voor niet-specifieke amplificatie wanneer het monster complex is (de relatieve reactietemperatuur is lager, en hoe hoger de verlengingstemperatuur, hoe beter de primerbindingsspecificiteit).
Wat de huidige technologie betreft, is variabele temperatuurversterking betrouwbaarder.
5. Hoe kan het risico op lekkage van nucleïnezuuramplificatieproducten worden vermeden?
Momenteel kiezen veel fabrikanten voor de PCR-buis van het kliertype als de nucleïnezuurreactiebuis, die wordt afgedicht door wrijving, en de temperatuurdenaturatie bij de denaturatie met variabele temperatuur bij de PCR-amplificatie met variabele temperatuur bereikt 90 graden.
Celsius.Het herhaalde proces van uitzetten bij hitte en samentrekken bij kou is een grote uitdaging voor het afdichten van de PCR-buis, en bij de PCR-buis van het warteltype is het relatief gemakkelijk om lekkage te veroorzaken.
Het verdient de voorkeur om de reactie uit te voeren met een volledig afgesloten kit/buis om lekkage van het reactieproduct te voorkomen.Het zou perfect zijn als er een volledig afgesloten kit zou kunnen worden ontwikkeld voor de extractie en detectie van nucleïnezuren.
Dus de nieuwe volautomatische nucleïnezuurextractie- en detectiemachine van New Tech heeft de bovenstaande vijf optimale keuzes.
Posttijd: 09-aug-2023
